親水色譜柱是一種專為分離極性和親水性化合物設(shè)計(jì)的色譜柱，在生物化學(xué)、藥物研發(fā)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。其核心在于填料表面帶有親水性基團(tuán)，如酰胺基、二醇基、兩性離子基團(tuán)等，能夠與水相溶劑產(chǎn)生強(qiáng)相互作用。這種設(shè)計(jì)使得親水色譜柱適合分離傳統(tǒng)反相色譜難以處理的強(qiáng)極性物質(zhì)，比如糖類、氨基酸、有機(jī)酸、核苷酸等。
親水色譜柱的工作原理基于溶質(zhì)與填料之間的氫鍵作用、偶極-偶極作用及親水分配機(jī)制。流動相多用乙腈-水或甲醇-水體系，常添加甲酸銨、乙酸銨等緩沖鹽調(diào)節(jié)保留行為。
親水色譜柱的技術(shù)特點(diǎn)主要包括以下幾個(gè)方面：
1、分離原理與選擇性
基于親水作用：親水色譜柱的分離原理主要基于樣品分子與固定相表面的親水相互作用，物質(zhì)的洗脫順序與反相液相色譜（RPLC）相反，極性強(qiáng)且親水性大的化合物通常被保留的時(shí)間更長。
獨(dú)t的選擇性：與常規(guī)的C18色譜柱等反相色譜柱具有不同的選擇性，對于一些在反相色譜中難以分離或保留較弱的極性化合物、親水性化合物，如有機(jī)酸、水溶性維生素、低聚糖、氨基酸、小分子縮氨酸和小分子核苷等，能夠提供更好的分離效果。
2、固定相特性
親水性：固定相具有較強(qiáng)的親水性，通常由含有親水基團(tuán)的硅膠等材料制成，能夠與極性化合物發(fā)生相互作用，實(shí)現(xiàn)對這類化合物的有效保留和分離。
適度的表面覆蓋率和封尾：通過合理的設(shè)計(jì)和處理，固定相具有適度的表面覆蓋率和良好的封尾，減少了非特異性吸附和拖尾現(xiàn)象，提高了峰形的對稱性和分離效果。
3、流動相兼容性
可使用高比例水相：能與100%水流動相條件兼容，在高含水量的流動相中對強(qiáng)極性化合物仍具有較強(qiáng)的保留能力，這與反相色譜中增加水的比例會導(dǎo)致樣品保留減小的特點(diǎn)形成鮮明對比。
流動相組成靈活：典型的HILIC分離條件中，流動相中水的含量通常在3%至40%之間波動，但也可根據(jù)具體樣品和分離需求在一定范圍內(nèi)調(diào)整，還可使用乙腈等有機(jī)溶劑與水混合形成不同的流動相體系。
4、峰形與檢測優(yōu)勢
良好的峰形：對酸性、堿性和中性化合物都能提供良好的峰形，有利于準(zhǔn)確定量和定性分析。
提高質(zhì)譜靈敏度：在與質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)，能夠提高質(zhì)譜的靈敏度，有助于檢測低濃度的目標(biāo)分析物，這是因?yàn)槠淞鲃酉嘟M成和分離特性更適合質(zhì)譜檢測，減少了基質(zhì)干擾等因素。
5、樣品處理與分析效率
簡化樣品處理：可以直接進(jìn)樣溶解在有機(jī)溶劑中的樣品，無需像一些其他色譜方法那樣進(jìn)行復(fù)雜的樣品前處理，如衍生化等，簡化了操作步驟，提高了分析效率。
承受高流速：由于流動相的低黏度特性，能夠承受更高的流速，從而縮短分析時(shí)間，提高分析效率，適用于快速分析和高通量篩選。
6、使用壽命與重現(xiàn)性
較長的使用壽命：在高含水量的流動相中使用時(shí)長壽命相對較長，尤其是在合適的操作條件下，能夠保持較好的性能和穩(wěn)定性。
優(yōu)良的重現(xiàn)性：具有優(yōu)良的批與批和色譜柱與色譜柱間的重現(xiàn)性，保證了分析結(jié)果的可靠性和可比性。
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